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渤海银鲳的消化酶活性研究
作者:网站采编关键词:
摘要：银鲳(Pampusargenteus)为近海暖温性中下层鱼类，分布于印度洋至西太平洋区，包括朝鲜至日本的西部海域、中国诸海、太平洋印度洋区以及印度的孟加拉湾、波斯湾等海域。该鱼肉质洁白
银鲳(Pampusargenteus)为近海暖温性中下层鱼类，分布于印度洋至西太平洋区，包括朝鲜至日本的西部海域、中国诸海、太平洋印度洋区以及印度的孟加拉湾、波斯湾等海域。该鱼肉质洁白、细嫩，富含蛋白质、脂肪、钙、磷、铁、维生素A、维生素B1等营养素，深受消费者的青睐，具有较好的市场开发前景。银鲳幼鱼主要摄食小鱼、箭虫和桡足类，成鱼主要摄食水母、底栖动物和小鱼。一些学者进行了银鲳的年龄与生长、成熟卵巢生化分析、肌肉生化分析、性腺发育规律、免疫器官的组织结构特征、消化道菌群分析、营养级及摄食习性、生殖力及渤海湾群体形态特征等研究[1-9]。
消化酶是消化系统分泌的能够催化食物分解的一类酶。鱼类消化酶的研究是鱼类消化生理研究的重要内容，是鱼类配合饲料研制的基础。周健恺等[10]研究了东海银鲳不同消化器官中消化酶活性的分布，并比较分析了野生银鲳成鱼和养殖银鲳幼鱼的消化酶(蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶)活性，彭士明等[11]开展了饲养密度对银鲳幼鱼增重率及消化酶活性的影响研究。关于渤海银鲳的消化酶研究未见报道，为此我们开展了相关研究，旨在为渤海银鲳资源的开发提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 实验材料
生物材料：海捕银鲳20尾，叉长(13.)cm、体重(132.)g。
主要仪器：TGL-16LM高速冷冻离心机、T6紫外可见分光光度计。
1.2 实验方法
1.2.1 原材料预处理 将银鲳放在冰块上解剖，分别取出胃部、肠道(分为前肠、后肠)、肝胰脏和幽门盲囊，剪碎后，于组织匀浆器内匀浆(pH 7.0磷酸缓冲溶液与组织比例为10∶1)，4 ℃抽提20～24 h，冷冻离心20 min (10 000 r/min)，上清液即为粗酶提取液，置于4 ℃条件下保存备用。
1.2.2 消化酶活性测定
1.2.2.1 淀粉酶活性2 mL 2%可溶性淀粉溶液中，依次加入1 mL pH 7.0的磷酸缓冲液、0.5 mL 1%NaCl溶液、0.5 mL酶粗提液(空白样加入同样体积的灭活酶)，30 ℃水浴锅中反应30 min后加入0.5 mL 3，5-二硝基水杨酸，煮沸5 min，冷却并离心，540 nm下测定吸光值，淀粉酶活性：1 mg蛋白的粗酶液每分钟水解淀粉产生1 mg麦芽糖为1个酶活力单位。
1.2.2.2 蛋白酶活性2%干酪素-0.1 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.2)1 mL，加入酶粗提液0.5 mL， 30 ℃水浴中反应15 min，加入0.5 mL 30%三氯乙酸 (空白样在加入三氯乙酸后再加入粗提酶液)，离心(8 000 r/min，4 min)，取1 mL上清液，加入0.4 mol/L Na2CO35 mL与稀释的Folin试剂1 mL，混匀，37 ℃水浴显色15 min。680 nm处测定吸光值。蛋白酶活性：1 mg蛋白的粗酶液每分钟水解干酪素产生1 μg酪氨酸为1个酶活力单位。
1.2.2.3 几丁质酶活性200 mL已冷却到4 ℃的33%浓盐酸中加入几丁质粉5 g，30 ℃水浴锅保温30 min，过滤，滤液中加入2 000 mL冷却至4 ℃的双蒸水，搅拌30 min，4 ℃冰箱过夜，离心，用双蒸水将沉淀洗至中性，分散至少许双蒸水中。
将l mL胶体几丁质溶解在0.2 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 6.6)中，配制成l%胶体几丁质-磷酸缓冲液，备用。
1%胶体几丁质-磷酸缓冲液中加入0.5 mL酶粗提液，30 ℃水浴反应30 min，沸水浴10 min，离心，0.5 mL上清液中加入0.5 mL 3，5-二硝基水杨酸，煮沸7 min，冷却，加蒸馏水4 mL，于540 nm处测定吸光值，用样本液加DNS试剂作为空白对照。几丁质酶的活性：1 mg蛋白的酶液每分钟生成l μg乙酰氨基葡萄糖为1个酶活力单位。
2 结果与讨论
2.1 不同组织器官淀粉酶活性的分布
不同组织器官中淀粉酶活性比较见图1，从图1看出，肝胰脏淀粉酶活性最强，其次是胃，后肠中淀粉酶活性最低，幽门垂中的淀粉酶活性介于胃和肠道中间。幽门垂的组织结构与肠壁组织相似，它是否可以分泌消化酶，没有相关资料报道，分析幽门垂中的消化酶主要可能来自于胃。
图1 银鲳不同组织器官中淀粉酶活性的比较
2.2 不同组织器官蛋白酶活性的分布
对于银鲳鱼来说，不同组织器官蛋白酶活性分布见图2，从图2看出，胃中蛋白酶活性最高，肝胰脏次之，前肠最低，幽门垂蛋白酶活性介于肝胰脏和肠之间，很可能胃就是银鲳消化蛋白质的主要器官。
图2 银鲳不同组织器官中蛋白酶活性的比较
2.3 不同组织器官几丁质酶活性的分布
资料研究证实，对于摄食甲壳动物的鱼类，几丁质酶活性较强，在银鲳的天然食物组成中，甲壳动物占了较大比例，分析比较不同器官几丁质酶的活性，对于确定它的来源尤为重要。从图3看出，几丁质酶活性以胃中最高，其次是后肠，肝胰脏中最低，据此推断，银鲳消化道中的几丁质酶可能来自摄食进入的甲壳动物分泌的几丁质酶，有待深入研究。
文章来源：《环渤海经济瞭望》 网址: http://www.hbhjjw.cn/qikandaodu/2021/0219/525.html
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